doc. Ing. Jiří Hatina

V této práci se setkáváme s několika zajímavými pojmy týkajícími se testování in vitro - a to např. s pojmem 3D kultury (tří dimenzionální kultury), jimiž myslíme alternativní pěstování buněk za účelem formace mnohobuněčných útvarů tzv. sféroidů. Snahou této publikace je přiblížení metodik, kterými lze dosáhnout vytvoření mnohobuněčného sféroidu, popis jeho struktury, metabolismu a možnosti využití v nádorové problematice např. ve vztahu k lékové rezistenci.

Tento studijní materiál je určen pro všechny studenty lékařských a přírodovědně zaměřených fakult, kteří chtějí získat nové vědomosti v oblasti obecných základů kultivace buněčných linií a buněčných modelů nádorové transformace. Materiál je rozdělen do 7 kapitol, ve kterých jsou přehledně zpracovány základní operace s buňkami v optimálních kultivačních podmínkách, typy buněčných kultur, popis jejich růstového cyklu, proliferace či diferenciace. Poslední kapitola je věnována kultivaci buněk nádorů s uvedením rozsáhlé tabulky vybraných nádorových linií z American Type Culture Collection, Rockville, Maryland, U.S.A.

Karcinom močového měchýře vychází z kmenových buněk urotelu. V naší laboratoři jsme vypracovali dva nové metodické přístupy k identifikaci a charakterizaci těchto kmenových buněk. Stabilní transfekce genu pro zelený fluoreskující protein pod kontrolou doxorubicin-responzivního promotoru umožňuje vizualizovat kmenové buňky na základě konstitutivní exprese efluxnich pump. Společná kultivace s nádorovými fibroblasty zásadně přispívá k udržení kmenového charakteru kokultivovaných nádorových buněk, které se nacházejí v bezprostředním kontaktu s nádorovými fibroblasty.

Bladder cancer originates from urothelial stem cells. In our laboratory, we have established two new methodological approaches towards identification and characterization of these cancer stem cells. Stable transfection of a doxorubicin-responsive green fluorescent protein reporter construct allows for a direct visualization of stem cells given their constitutive expression of efflux pumps. Coculture with carcinoma fibroblasts is crucial for preserving stemness of cocultured cancer cells immediately interacting with carcinoma fibroblasts.